一、药敏试验操作步骤
1制作待检菌液
在超净工作台内挑取培养18-24h普通营养琼脂平板上的菌落，悬于含3ml无菌生理盐水的试管中。混匀后与比浊管比浊，调整浊度至0.5麦氏标准（相当于1-2*10 cfu/ml）。
2接种细菌
在超净工作台内用无菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上挤压去掉多余的菌液，均匀涂抹整个平板表面，最后沿平板内缘涂抹一周（用接种环密集划线法也可以）。
3贴药敏片
将涂抹均匀的培养皿底部用记号笔做好标记，眼科镊子在酒精灯上灼烧灭菌待冷却后，镊取各种购买或自制的药敏片，分别贴于相应的位置上，用镊子轻轻按压纸片使药敏纸片与培养基表面密贴；药敏纸片应在培养基表面均匀分布，各纸片中心距离大于24mm，纸片距边缘距离大于15mm，这样一个直径90mm的培养皿可贴7个药敏纸片。
4培养
最后将贴好药敏纸片的平板倒置放于37℃±1℃恒温培养箱，培养16-18h后取出观察结果。
二、结果观察与判定
1抑菌圈直径观察
抑菌圈直径以肉眼见不到细菌明显生长的边缘为限（变形杆菌可蔓延生长至某些抗微生物的抑菌圈内，表现为一种细薄微弱的生长，形成一层明显的抑制性生长环，对于这种情况应忽略不计；对于磺胺类药物，应忽略抑菌圈内轻微的细菌生长，少于20%的菌苔，以明显的边缘为抑菌圈直径）。
2根据药敏片周围抑菌圈的大小，判定药物的敏感度
敏感：表示被测菌株所引起的感染可以用常用量该抗菌药物治愈。
中介：表示被测菌株对常规用药体液或组织中的药物浓度的反应率低于敏感菌株，使用高于正常给药量有疗效。
耐药：表示被测菌株不能被常用剂量药物抑制，临床疗效不佳。
3判定
不同菌株结果判定标准不同；不同药物判定标准不同。最终判定结果应以WS/T125-1999列表中对应的标准为准。也可以根据以下标准进行判定：
药敏试验药物配制及判定标准
|
编号 |
药品名称 |
商品药敏片含量 （μg/片） |
稀释比例(ml/mg) |
判定标准 抑菌圈直径（mm） |
||
|
S（敏感） |
I（中介） |
R（耐药） |
||||
|
1 |
阿莫西林 |
20 |
5 |
|||
|
2 |
庆大霉素 |
10 |
10 |
≥15 |
13-14 |
≤12 |
|
3 |
硫酸阿米卡星 |
30 |
3.33 |
≥17 |
15-16 |
≤14 |
|
4 |
多西环素 （强力霉素） |
30 |
3.33 |
≥14 |
11-13 |
≤10 |
|
5 |
盐酸环丙沙星 |
5 |
20 |
≥21 |
16-20 |
≤15 |
|
6 |
左氧氟沙星 |
5 |
20 |
≥17 |
14-16 |
≤13 |
|
7 |
诺氟沙星 |
10 |
10 |
≥17 |
13-16 |
≤12 |
|
8 |
头孢曲松钠 |
30 |
3.33 |
≥23 |
20-22 |
≤19 |
|
9 |
头孢他啶 |
30 |
3.33 |
≥21 |
18-20 |
≤17 |
|
10 |
头孢噻呋 |
2 |
50 |
|||
|
11 |
替米考星 |
15 |
6.67 |
|||
|
12 |
硫酸新霉素 |
30 |
3.33 |
|||
|
13 |
盐酸林可霉素 |
2 |
50 |
|||
|
14 |
恩诺沙星 |
5 |
20 |
|||
|
15 |
硫酸粘菌素 |
10 |
10 |
≥11 |
- |
≤10 |
|
16 |
克林霉素 |
2 |
50 |
|||
|
17 |
红霉素 |
15 |
6.67 |
|||
|
18 |
克拉霉素 |
15 |
6.67 |
|||
|
19 |
阿奇霉素 |
15 |
6.67 |
|||
|
20 |
磺胺间甲氧嘧啶钠 |
300 |
0.33 |
|||
|
21 |
安泰嘉 （泰乐菌素） |
0.2 |
﹥20极敏15-20高敏 10-14中敏 ＜10不敏感 （商品药） |
|||
|
22 |
球光 （磺氯吡嗪钠） |
1 |
||||
|
23 |
卵管嘉 （烟酸诺坲沙星） |
10 |
||||
|
24 |
杆菌比克 （氧氟沙星） |
0.2 |
||||
|
25 |
肠安嘉 （盐酸环丙沙星） |
3.2 |
||||
|
26 |
肠炎嘉 （硫酸新霉素） |
0.87 |
||||
|
27 |
克球嘉 |
2 |
|
（磺胺间甲氧嘧啶 钠） |
||||||
|
28 |
莫能菌素 |
20 |
0.50 |
|||
|
29 |
痢菌净 |
30 |
0.33 |
＞15 |
10-15 |
＜10 |
|
30 |
盐酸克林霉素 |
5 |
2.00 |
|||
|
31 |
黄霉素 |
30 |
0.33 |
|||
|
32 |
磺胺氯吡嗪钠 |
300 |
0.03 |
|||
|
33 |
甲氧苄啶 |
5 |
2.00 |
|||
|
34 |
杆菌肽锌 |
30 |
0.33 |
|||
|
35 |
盐酸沃尼妙林 |
30 |
0.33 |
|||
|
36 |
酒石酸泰乐菌素 |
50 |
0.20 |
|||
|
37 |
硫酸氨普霉素 |
30 |
0.33 |
|||
|
38 |
杆立清 |
0.04 |
﹥20极敏15-20高敏 10-14中敏 ＜10不敏感 （商品药） |
|||
|
39 |
新畅美 |
0.1 |
||||
|
40 |
肠安泰 |
0.04 |
||||
|
41 |
喘痢嘉 |
0.02 |
||||
|
42 |
咳喘嘉 |
0.0264 |
||||
|
43 |
呼感康宁 |
0.1 |
备注：商品要通常按照说明书用量原倍配置药敏纸片，可视情况做 2 倍、4 倍浓度配置；商品药敏感性判定通常Φ﹥20mm 极敏；15-20mm 高敏；10-14mm 中敏；＜10mm 不敏感；某些原料药按国标规定判定，没有具体依据的通常也按照﹥20mm 极敏；15-20mm 高敏；10-14mm 中敏；＜10mm 不敏感判定；
抑菌圈大小使用游标卡尺精准测量，也可用直尺粗略测量（测直径）。
三、注意事项
1要求待检病料新鲜、无污染。
2整个试验操作过程注意无菌操作。
3培养基厚度：要求厚度为4mm，直径90mm的培养皿约25ml/平皿；菌液一定要比浊；尽量选用同一品牌、大小相同的棉拭子涂布细菌；自制药敏片的厚度必须是新华1号滤纸。
4药敏片保存：长时间不用置于-20冷冻保存，平时常用可放于4-8℃冷藏；药敏片从冰箱拿出要与室温平衡20min后打开盖使用，以免潮湿影响结果。
