首页
血液是机体内最重要的液体之一，对保障动物机体的新陈代谢、功能调节以及机体内外环境平衡起重要作用。近年来研究表明，动物的生理状态和健康状况可通过血液的血常规等直接反映。血常规，也称全血细胞计数，指用血液分析仪计数血液中红细胞、白细胞和血小板的数量，测定血细胞的体积或某些生物学特性、血细胞内的某种物质含量等，由此判断血细胞和其他血液成分的质与量有无异常。
医学上，血常规为评估患者健康状况、诊断疾病以及监测治疗效果的重要依据。近年来国内外不少研究表明猪的血常规指标可以用来度量猪只的生长和健康状况。例如陈少康等通过分析普通群、病猪群血常规指标的变化，发现中性粒细胞可以作为诊断猪群是否即将感染或已经处于感染初期的一个辅助指标；涂尾龙等研究发现气喘病组的梅山猪群体的白细胞数、中性粒细胞数、淋巴细胞数、红细胞比积、血小板大细胞比率等显著高于正常组的梅山猪群体，为筛选抗气喘病猪群提供数据参考；Mpetile等发现，与高剩余采食量（RFI）系仔猪相比，低RFI系仔猪的淋巴细胞数和单核细胞数较低，但血红蛋白浓度和红细胞体积较高。Bai等利用断奶至育肥期的猪群构建自然疾病挑战模型并收集表型数据发现自然疾病挑战下猪只的血常规性状具有遗传性，并与生长和治疗等相关，而且这表明血常规性状具有成为预测恢复力表型的潜力。
目前在实验动物血液采集过程中，由于采血部位不当、抗凝剂不足或不当、血液抽取速度过慢等原因导致血液样本凝血的现象较常见。凝血对血常规指标测定的准确性有一定影响。本课题组在对4周龄与7周龄仔猪血常规测定中，观察到一些血液样本存在不同程度的凝血现象。因此本文通过分析4周龄与7周龄仔猪在不同凝血程度下血常规指标的变化情况，以期探究不同凝血程度对仔猪血常规指标的影响，为后续研究中血常规指标的测定提供相关参考，从而为利用血常规开展猪群健康状况、免疫机理、发病机制等研究奠定技术基础。
1 材料与方法
1.1 实验动物
本研究试验猪来自滨洲华育种猪有限公司。选择出生日期相近、健康、21日龄断奶的大约克仔猪，饲养1周后，于断奶后1周（即4周龄）和断奶后3周（即7周龄）采集血液。
1.2 血液样品采集
用一次性注射器于前腔静脉取血2 mL，立刻注入2 mL EDTA-K2抗凝管中，并颠倒混匀数次，放入4°C的保温盒内保存，并于12 h内完成测定。
1.3 血常规指标检测
采用BC-5000 Vet全自动血液细胞分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产）进行血常规指标测定。血常规指标分为红细胞、白细胞和血小板3大类23项指标，其中红细胞类指标包括红细胞总数（Red blood cell，RBC）、血红蛋白（Hemoglobin，HGB）、红细胞压积（Hematocrit，HCT）、平均红细胞体积（Mean corpuscular volume， MCV）、平均红细胞血红蛋白含量（Mean corpuscular hemoglobin，MCH）、平均红细胞血红蛋白浓度（Mean corpuscular hemoglobin concentration，MCHC）、红细胞分布宽度变异系数（Red cell distribution width coefficient of variation，RDW-CV）、红细胞分布宽度标准差（Red cell distribution width standard deviation，RDW-SD）8项；白细胞类指标包括白细胞总数（White blood cell，WBC）、中性粒细胞数（Neutrophil，NEU）、淋巴细胞数（Lymphocyte，LYM）、单核细胞数（Monocytes，MON）、嗜酸性粒细胞数（Eosinophils， EOS）、嗜碱性粒细胞数（Basophil granulocyte，BAS）、中性粒细胞百分比（Neutrophil percentage， NEU%）、淋巴细胞百分比（Percentage of lymphocytes，LYU%）、单核细胞百分比（Percentage of monocytes，MON%）、嗜酸性粒细胞百分比（Percentage of eosinophils，EOS%）、嗜碱性粒细胞百分比（Percentage of basophils，BAS%）11项；血小板类指标包括血小板总数（Total platelet count，PLT）、血小板压积（Plateletcrit，PCT）、血小板体积（Mean platelet volume，MPV）、血小板分布宽度（Platelet distribution width，PDW）4项。
1.4 统计分析
数据利用Excel 2019初步整理，以“平均值±标准差”表示。利用GraphPad Prism10.1.2软件对各项指标之间进行单因素方差分析，利用R语言fisher.test函数进行Fisher精确检验。其中P＜0.05表示差异显著，P＜0.01表示差异极显著，P＞0.05表示差异不显著。
2 结果与分析
2.1 样本凝血率分析
本研究采集1 067头4周龄和961头7周龄、健康大约克断奶仔猪的血液，采用BC-5000 Vet全自动血液细胞分析仪对包括红细胞、白细胞和血小板3大类23项血常规指标进行测定。根据血常规测定时血液的凝固情况，把样本分为无凝血、轻度凝血和重度凝血3类。其中，4周龄凝血样本151个，占14.15%，7周龄凝血样本67个，占6.97%。4周龄和7周龄凝血率差异极显著（Fisher精确检验P = 1.876×10-7）。
根据凝血程度进一步细分，4周龄凝血样本中，轻度凝血样本60个，占5.62%，重度凝血样本91个，占8.53%。7周龄凝血样本中，轻度凝血样本39个，占4.06%，重度凝血样本28个，占2.91%（见图1）。
图1 不同日龄仔猪样本凝血率
2.2 不同凝血程度对红细胞类指标的影响
不同凝血程度对红细胞类指标的影响详见表1。由表1可见，凝血对4周龄仔猪血液的大部分红细胞类指标有显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）影响。4周龄样本中，重度凝血样本的RBC、HGB和HCT极显著低于无凝血样本（P＜0.01），而轻度凝血样本与无凝血样本间无明显差异（P＞0.05），说明重度凝血对RBC、HGB和HCT有极显著影响。轻度凝血和重度凝血样本的MCH和MCHC均显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）高于无凝血样本，说明轻度凝血即可对MCH和MCHC产生显著影响。与4周龄相比，凝血对7周龄仔猪红细胞类8个指标的影响较小，均没有达到显著水平（P＞0.05）。
2.3 不同凝血程度对白细胞类指标的影响
不同凝血程度对白细胞类指标的影响详见表2。由表2可见，凝血对4周龄仔猪血液的大部分白细胞类指标有显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）影响。对于4周龄样本，重度凝血样本的WBC极显著低于无凝血样本（P＜0.01），而轻度凝血样本的WBC也有下降，但没有达到显著差异（P＞0.05）。随着凝血加重，WBC中的NEU、LYM、BAS和BAS%均呈逐渐降低趋势，且重度凝血样本的NEU和BAS变化达到显著或极显著水平。值得注意的是，凝血样本的EOS呈增加趋势，且重度凝血样本的EOS增加达到显著水平。与4周龄相比，凝血对7周龄白细胞指标的影响趋势是一致的，但程度较低，只有LYM、BAS、NEU%、EOS%和BAS%达到显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）水平。
2.4 不同凝血程度对血小板类指标的影响
不同凝血程度对血小板类指标的影响详见表3。由表3可见，凝血对4周龄仔猪血液的全部血小板类指标有显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）影响。4周龄仔猪血液中，轻度凝血即导致PLT、PCT极显著降低（P＜0.01）导致PDW极显著升高（P＜0.01）。且相比轻度凝血，随着凝血程度的增加，重度凝血的PLT、PCT、PDW进一步极显著降低或升高（P＜0.01）。轻度凝血对MPV无显著影响（P＞0.05），但重度凝血样本的MPV极显著低于无凝血样本和轻度凝血样本（P＜0.01）。与4周龄相比，凝血对7周龄血小板指标的影响趋势是一致的，但程度较低。轻度凝血对PCT、PDW和PCT有显著（P＜0.05）或极显著影响（P＜0.01），对PDW无显著影响（P＞0.05）。重度凝血与轻度凝血间各指标均无显著差异（P＞0.05）。
3 讨论
血常规检验的准确性受到多种因素的影响。血液标本的质量会直接影响血常规检测结果的准确性，从而对临床诊断和治疗产生不利影响。凝血是影响血液质量的主要因素之一。而本研究分析了1 067头4周龄和961头7周龄、健康大约克断奶仔猪的血液样本，发现4周龄凝血样本占总样本数的14.15%，7周龄凝血样本占总样本数6.97%。本研究中猪血液样本的凝血比例远高于赵文新等报道的医院检验时血液样本的凝血率（1.28%～2.07%）。造成这种现象的原因有很多，除了医学检测中常出现的采血部位不当、抗凝剂不足或不当、血液抽取速度过慢等原因外，仔猪保定困难、血管较细等也是造成本研究中血液凝固样本比例较高的主要原因。
本研究中，轻度凝血即可对4周龄仔猪血液的红细胞类、白细胞类和血小板类的部分指标有显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）的影响，且随着凝血程度增加，对血常规指标的影响程度进一步加大。机体受物理损伤后，血小板聚集成血小板凝块。接着血小板又经过复杂的变化产生凝血酶，使邻近血浆中的纤维蛋白原变为纤维蛋白，在纤维蛋白的网状作用下将红细胞、白细胞收在一起就形成了血液凝块。凝血样本的RBC、WBC和PLT均显著下降，这与血液凝块中凝集了大量RBC、WBC和PLT的凝血机理相一致。与RBC、WBC和PLT相一致，红细胞类、白细胞类和血小板类中大部分其他指标也显著下降或呈下降趋势，凝血对这些指标的影响可能是通过影响RBC、WBC和PLT来发挥作用的。值得注意的是，本研究中观察到凝血样本的EOS、EOS%、LYM%和PDW显著升高。我们推测，EOS、EOS%、LYM%升高可能与不同白细胞体积、特性不同在血液凝固过程中参与的程度不同等有关。PDW是用于评估血小板体积大小的变异性的指标，血小板过大或过小可能导致凝血功能的异常。PDW升高，可能与血液发生凝血时，均匀、活性好的血小板凝集的多，导致血小板体积大小的变异性的增加有关。
4周龄仔猪血液凝血率（14.15%）是7周龄仔猪凝血率（6.97%）的2倍。与4周龄相比，凝血对7周龄仔猪红细胞类、白细胞类和血小板类指标的影响趋势基本是一致的，但程度较低。可以看出，凝血对4周龄仔猪的凝血率和血常规指标的影响均更大。这种现象可能是由于多方面因素造成，笔者推测可能原因，一是仔猪越小，血管越细，采血的速度越慢，凝血发生率越高和凝血程度越严重；二是仔猪免疫系统尚未发育完全，仔猪越小，抗应激能力越差，体内的生理生化指标变化越大。
4 结论
本研究中，凝血对仔猪血常规中大部分红细胞类和白细胞类指标有显著影响，对全部血小板类指标均有显著影响。不同周龄仔猪相比较，仔猪越小，凝血率越高，凝血对血常规的影响程度越高。血常规检测中应严格把握血液标本的质量以确保血常规检测结果的准确性和可靠性。
