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非洲猪瘟无有效治疗药物，早发现、精准判定是猪场生物安全防控的关键。qPCR 核酸检测作为当前猪场排查非瘟最主流手段，很多从业者对阳性、可疑样品的判定边界仍容易混淆。核酸检测通过识别病毒特异性核酸序列判断感染情况，Ct 值是核心判定指标，病毒载量越高，Ct 值越低。检测全程包含采样、核酸提取、上机扩增多个环节，且每批次试验必须设置阴、阳性对照，对照不达标则整次检测结果无效。下面整理了猪场非瘟核酸检测完整确诊判定标准，明确阴性、阳性、可疑样品的判定规则与复检要求，方便一线快速参考，规范实验室结果解读，避免误判造成生产损失。
核酸检测的核心原理是检出样本内入侵病原体的核酸物质，通过分析淋巴结、血液、脾脏等组织样本，判断机体是否受到病毒感染。新冠核酸检测与猪非洲猪瘟核酸检测底层原理一致；一旦核酸检出阳性，即可证实样本中存在目标病毒。除朊病毒以外，所有生命体均含有核酸，分为脱氧核糖核酸（DNA）与核糖核酸（RNA）。新冠病毒属于 RNA 病毒，而非洲猪瘟病毒为双链 DNA 病毒。
目前检测非洲猪瘟、新冠病毒特异性基因片段最常用手段为荧光定量 PCR（实时荧光定量 PCR 仪）。qPCR 仪器会记录荧光信号达到预设阈值对应的循环数，即 Ct 值。Ct 值和样本内病毒核酸载量负相关：病毒核酸浓度越高，Ct 数值越低。
样本采集
采样人员必须穿戴生物安全防护用品，同步做好现场消毒与废弃物无害化处置。样本类型分为三类：
活猪样本：血液、扁桃体液等液体样本；
病死猪样本：脾脏、肺脏、肾脏、淋巴结、肌肉等组织样本；
环境样本：饲料、运输车辆、粪便、污水、栏舍环境等周边环境样品。
病毒核酸提取
液体类样本（血液、扁桃体液等）一般无需预处理，可直接采用核酸提取试剂盒提取基因组 DNA。部分抗抑制效果优异的 qPCR 试剂，允许液体样本不经提取直接上机扩增。组织类样本在核酸提取前，必须完成研磨裂解处理。
qPCR 检测操作
检测主要包含反应体系配制、加样与仪器扩增。每批次检测必须同步设置阳性对照与阴性对照，详细操作参数参照试剂盒说明书执行。
结果判读
不同试剂盒厂商会依据试剂性能，设定专属阳性判定标准。
试验质控要求
阴性对照：Ct≥38 或无 Ct 检出；
阳性对照：Ct≤35，同时出现典型扩增曲线；
阴阳对照不满足上述条件，整批次试验作废，结果无效。
样品判定标准
前提：本批次实验阴、阳性对照质控合格，方可进行样品判定。
阴性：样品 Ct≥38 或无 Ct 值，判定为阴性；
阳性：样品 Ct≤35，且出现典型扩增曲线，判定核酸阳性；
可疑：样品 Ct＞35 且＜38，同时扩增曲线典型，需复检。复检仍满足该条件判为阳性，否则判阴性。
